德阳市人类细胞与生物样本库 细胞及组织质控样本年度检测报告

  德阳市人类细胞与生物样本库  

细胞及组织质控样本年度检测报告

2021年度产品质量检测于本年12月份已全部完成，检测结果均符合要求。良好的客观数据不仅表明了我司干细胞库的产品质量稳定，状态良好，更反映了技术与质量控制的实力。本次年度质量检测包括：脐带/蜕膜来源的间充质干细胞、胎盘来源的造血干细胞。具体结果如下:

1. 脐带和胎盘

为验证脐带及蜕膜来源的间充质干细胞在冻存复苏后能够维持其细胞特异性、活性、自我增殖能力及多向分化潜能，对冻存的脐带、蜕膜间充质干细胞样本在复苏后进行下列项目检测：间充质干细胞存活能力恢复率、间充质干细胞表面标志物检测、间充质干细胞生长曲线、间充质干细胞培养形态、间充质干细胞诱导分化成脂、成骨、成软骨检测。在 2021年12月份，我们从液氮储存罐中分别随机取出两份脐带质控样本以及两份蜕膜质控样本进行质量测试，测试结果如下：

1.1. 间充质干细胞存活能力恢复率检测结果

样本编号检测日期低温保存时间复苏后活率

脐带-A2021.12.0316个月98.60%

脐带-B2021.12.0316个月91.60%

蜕膜-A2021.12.0319个月94.78%

蜕膜-B2021.12.0318个月91.25%

1.2. 间充质干细胞表面标志物检测结果

样本编号CD73    表达率CD90   表达率CD105    表达率CD14   表达率CD19   表达率CD34   表达率CD45   表达率HLA-DR表达率

脐带-A98.53%99.75%99.47%0.28%0.11%0.14%0.16%0.03%

脐带-B98.33%99.65%99.87%0.38%0.15%0.17%0.26%0.07%

蜕膜-A98.52%99.46%99.25%0.04%0.06%0.11%0.06%0.03%

蜕膜-B98.72%99.47%99.53%0.06%0.07%0.17%0.08%0.01%

1.3. 间充质干细胞生长曲线测试结果

1.4. 间充质干细胞诱导分化成脂、成骨、成软骨分化测试结果

1.4.1. 脐带间充质干细胞诱导分化成脂肪细胞、成骨及成软骨细胞测试结果

   脐带间充质干细胞通过原代培养、传代培养后，分别加入成脂诱导剂、成骨诱导剂及成软骨诱导剂培养，采用倒置显微镜观察诱导后的细胞形态变化，并通过油红O染色、茜素红染色及阿尔新蓝染色法对其脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞表型进行鉴定。

   结果显示：经油红O染色,细胞质内出现红色脂滴（脂肪细胞）；茜素红染色表明聚集的细胞团中央能形成钙化结节，表现为桔红色沉积（成骨细胞）；阿尔新蓝染色，阿尔新蓝使软骨组织上蛋白多聚糖染色，呈现深蓝色（成软骨细胞）。表明人脐带间充质干细胞具有多向分化潜能。

1.4.2. 蜕膜间充质干细胞诱导分化成脂肪细胞、成骨及成软骨细胞测试结果

   蜕膜间充质干细胞通过原代培养、传代培养后，分别加入成脂诱导剂、成骨诱导剂及成软骨诱导剂培养，采用倒置显微镜观察诱导后的细胞形态变化，并通过油红O染色、茜素红染色及阿尔新蓝染色法对其脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞表型进行鉴定。

   结果显示：经油红O染色,细胞质内出现红色脂滴（脂肪细胞）；茜素红染色表明聚集的细胞团中央能形成钙化结节，表现为桔红色沉积（成骨细胞）；阿尔新蓝染色，阿尔新蓝使软骨组织上蛋白多聚糖染色，呈现深蓝色（成软骨细胞）。表明人蜕膜间充质干细胞具有多向分化潜能。

1.5脐带、蜕膜间充质干细胞质量保证测试结论

1.5.1. 细胞存活能力恢复率测试结果及间充质干细胞培养形态证明脐带或蜕膜来源的间充质干细胞在一定时间的超低温冷藏后仍能维持高活性；

1.5.2. 脐带或蜕膜来源的间充质干细胞表面标志物检测以及培养形态测试结果符合ISCT（国际细胞治疗协会）制定的间充质干细胞特异性标准；

1.5.3. 脐带或蜕膜来源的间充质干细胞生长曲线测试证明了脐带或蜕膜来源的的间充质干细胞经过一定时间的冻存后依然能保持自我增殖的能力； 

1.5.4. 脐带或蜕膜来源的间充质干细胞诱导分化为脂肪细胞、骨细胞及软骨细胞，表明脐带或蜕膜来源的间充质干细胞具有多向分化潜能。

2. 胎盘造血干细胞

冻存的胎盘造血干细胞样本在复苏后会进行细胞存活能力恢复率和细胞集落形成单位的测试，以验证细胞的活性及自我增殖和分化能力。在2021年12月份，我们从液氮储存罐中分别随机取出两份胎盘来源造血干细胞质控样本进行质量测试，测试结果如下：

2.1. 测试结果

样本编号检测日期低温保存时间复苏后 活率有核细胞浓度（106/ml）CD34+细胞表达率集落形成单位浓度（103/ml）

造血干-A2021.12.0817个月97.95%9.81.24%7.5

造血干-B2021.12.0816个月97.97%5.63.68%59.8

备注：上表中“集落单位形成浓度”表明冻存胎盘造血干细胞经过一段时间的冻存后，依然能保持自我增值及分化能力。由于每个样本细胞浓度有差异，所以其集落形成单位浓度也存在差异，但不代表自我增殖分化能力的差异。

2.2. 胎盘造血干细胞质量保证测试结论

2.2.1. 细胞存活能力恢复率测试结果证明胎盘造血干细胞在一定时间的超低温冷藏后仍能维持高活性；

2.2.2. 细胞集落形成单位测试结果证明了胎盘造血干细胞经过一定时间的冻存后依然能保持自我增殖和分化的能力。

3. 年度检测结论

3.1. 以上数据可以证明长期的冷冻保存对脐带/蜕膜来源的间充质干细胞的活性和功能不会造成影响。

3.2. 以上数据可以证明长期的冷冻保存对胎盘造血干细胞的活性和功能不会造成影响。

注：以上测试样本为实验室内部质控样本，其处理过程和冻存环境与客户样本完全相同。未得到客户许可，我们不会用客户的样本做任何实验室测试！